Неонатальный скрининг важен для раннего выявления многих нарушений обмена веществ (НБО). Он направлен на скорейшую диагностику и лечение больных новорожденных, чтобы предотвратить развитие болезни, инвалидность и смертность, связанные с НБО. Программа скрининга включает в себя несколько важных частей: тестирование, обучение, контроль, диагностика, лечение, управление и оценка. Развитие лабораторных технологий, таких, как тандемная масс-спектрометрия (МС/МС), которая является более специфическим, чувствительным, надежным и всеобъемлющим методом, чем традиционные анализы, увеличило число генетических заболеваний, которые могут быть диагностированы при скрининге новорожденных. На сегодняшний день разные страны имеют разный перечень заболеваний, включенных в программу неонатального скрининга. Это связано с особенностями системы здравоохранения стран, имеющимися финансовыми ресурсами, активностью профессионального сообщества и социальной ориентированностью общества в целом. Главная задача при принятии программ скрининга - соблюсти баланс между количественными (число скринируемых заболеваний) и качественными (эффективность скрининга) показателями. В последние годы активно развиваются технологии обнаружения лизосомных болезней накопления методом МС/МС. Пилотные проекты разных стран показали эффективность этого метода. Они позволили уточнить частоту заболеваний и спектр мутаций. Сегодня широко обсуждается возможность включения тестов на лизосомные болезни накопления в массовый скрининг. Метод NGS, который позволяет относительно быстро искать мутации в большом числе генов, также оказался эффективным способом диагностики НБО. В настоящее время активно обсуждается перспектива внедрения NGS в программы неонатального скрининга, несмотря на то, что у данного метода имеются некоторые ограничения, такие, как сложность клинического анализа, интерпретации результатов, хранения данных секвенирования.

По данным массового неонатального скрининга в РК за период 2007 г. - 1 полугодие 2017 г. проскринировано 2 520 053 новорожденных. Средний охват новорожденных за время внедрения неонатального скрининга в РК с 2011 года составил 73,1%, средний охват варьирует в отдельных регионах РК. С 2007 года в программе неонатального скрининга выявлено 105 детей с фенилкетонурией и 336 с врожденным гипотиреозом. Отмечены региональные особенности частоты встречаемости ФКУ и ВГ, что, возможно, определяется популяционными особенностями, в частности этническим составом, и варьированием охвата неонатальным скринингом регионов.

Применение новых технологий диагностики для раннего выявления наследственных болезней обмена показало их значительные преимущества (максимальная аналитическая специфичность и чувствительность, высокая пропускная способность) и целесообразность использования в неонатальном скрининге. Снижение количества ложноположительных результатов, одномоментное определение большого количества биохимических показателей в минимальном количестве биологического образца, существенно снизило общую продолжительность лабораторного исследования и обеспечило высокую производительность диагностического процесса. Однако недостаточная специфичность определяемых маркеров диктует необходимость применения молекулярно-генетических исследований как подтверждающих методов диагностики. Быстрота выполнения, относительная низкая стоимость, сравнительно простая интерпретация полученных результатов высокопроизводительного секвенирования следующего поколения (NGS), позволили рекомендовать его как завершающий этап диагностики неонатального скрининга.

Представлен анализ работы медико-генетической службы Бурятии по массовому скринингу новорожденных. Проведено сравнение частот фенилкетонурии, врожденного гипотиреоза, адреногенитального синдрома, муковисцидоза, галактоземии за период 2005- 2016 гг. с данными по другим российским регионам. Полученные частоты наследственных болезней обмена, тестируемых по неонатальному скринингу для Бурятии, укладываются в диапазон величин, описанных для различных регионов страны. Данная информация является актуальной и может быть положена в основу разработки программ профилактической направленности для улучшения оказания медико-генетической помощи населению Республики Бурятия. Перспективами развития доклинической диагностики болезней обмена является увеличение спектра тестируемых по скринингу заболеваний с использованием тандемной масс-спектрометрии.

Исследован полиморфизм митохондриальной ДНК (мтДНК) в группе пациентов с клинически выраженным атеросклерозом сонных артерий и в контрольной группе индивидов с субклиническим атеросклерозом. Определены частоты основных гаплогрупп мтДНК. Сравнение частот гаплогрупп H, U, J и T в исследуемых выборках показало более высокую частоту гаплогруппы J в контроле: 17,65%, по сравнению с 4,55% в группе больных (p = 0,0145). Полученные результаты указывают на протективный эффект гаплогруппы J в отношении развития клинически выраженного каротидного атеросклероза.

Цель. Разработать ДНК-технологию прогноза эффективности неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) рака молочной железы (РМЖ) на основе определения состояния метилирования ограниченного набора маркеров метилирования ДНК методом многолокусной метилчувствительной полимеразной цепной реакции (МЧ-ПЦР). Задачи. (1) Провести широкогеномный анализ метилирования ДНК из биоптатов опухолей молочной железы до проведения НАХТ с применением антрациклинов. (2) Сформировать ограниченную панель маркеров метилирования ДНК, наиболее информативных с точки зрения прогноза эффективности НАХТ. (3) Разработать и оптимизировать лабораторный протокол многолокусной МЧ-ПЦР для определения статуса метилирования маркеров разработанной панели. (4) Оценить диагностические свойства полученной панели маркеров метилирования ДНК. Материалы и методы. Методом XmaI-RRBS проведён широкогеномный анализ 27 биопсийных образцов РМЖ люминального B подтипа, взятых до лечения под контролем УЗИ. По результатам XmaI-RRBS выбраны 10 генов, состояние метилирования промоторов которых наиболее эффективно маркирует эпигенетические подтипы опухолей с разным ответом на НАХТ. Состояние метилирования выбранных маркеров определяли методом МЧ-ПЦР с тремя пулами праймеров в выборке из 40 образцов ДНК биопсийных образцов РМЖ люминального B подтипа, взятых до лечения. Оценку диагностических свойств системы проводили методом ROC-анализа. Результаты. По данным широкогеномного анализа метилирования ДНК в качестве наиболее информативных маркеров чувствительности РМЖ к НАХТ с использованием антрациклинов определили участки генов SLC9A3, C1QL2, DPYS, IRF4, ADCY8, KCNQ2, TERT, SYNDIG1, SKOR2 и GRIK1 . Для проведения локус-специфического тестирования состояния метилирования этих маркеров разработали систему многолокусной МЧ-ПЦР. По результатам локус-специфического тестирования определили диагностические свойства системы: площадь под ROC-кривой составила 84%, чувствительность системы - 82% при специфичности 80%, точность - 82%. Выводы. Система, включающая ограниченное количество маркеров метилирования ДНК, позволяет эффективно прогнозировать ответ опухоли молочной железы люминального В подтипа на НАХТ с использованием антрациклинов по результатам анализа биопсийного материала, полученного до начала лечения.

Матриксные металлопротеиназы и их ингибиторы вносят значительный вклад в регуляцию межклеточных взаимодействий и, как следствие, в поддержание структуры ткани и ее надлежащего функционирования. В работе изучено метилирование промоторных областей 11 генов матриксных металлопротеиназ ( MMP2, MMP11, MMP14, MMP15, MMP16, MMP17, MMP21, MMP23В, MMP24, MMP25, MMP28 ), а также 4 генов ингибиторов матриксных металлопротеиназ ( TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4 ). Коллективно представители этих семейств участвуют в регуляции деградации белков матрикса, сигнальной трансдукции, процессов адгезии и миграции, клеточной дифференцировки, ангиогенеза и апоптоза. Частоты аномального метилирования промоторных областей генов MMP2, MMP23B, MMP24, MMP25, MMP28 при раке молочной железы составили 7,7%, 17%, 11,9%, 15,4% и 4,9% соответственно. Установлено, что промоторные регионы генов TIMP1, TIMP4, MMP14 MMP21 конститутивно метилированы в тканях молочной железы.

Проведено комплексное молекулярно-генетическое обследование больных с ретинобластомой. Для диагностики заболевания использовалась внедренная в практическую деятельность ФГБНУ «МГНЦ» новая медицинская технология, включающая методы таргетного высокопроизводительного параллельного секвенирования ДНК и мультиплексной амплификации лигированных зондов (MLPA). Поиск точковый мутаций и коротких инсерций/делеций в гене RВ1 осуществляли с пременением секвенирования нового поколения на приборе Ion Torrent PGM. Для выявления протяженных делеций в гене RВ1 использовали метод MLPA. В группе пациентов с билатеральной формой ретинобластомы мутации в гене RB1 выявлены в 96,4% случаев. В выборке больных с односторонней формой заболевания генетические нарушения обнаружены у 31,7% пациентов. Методом MLPA выявлены соматические делеции в гене RВ1 в ДНК опухолей у 47,6% пациентов и герминальные делеции - у 4,4% больных.

В работе представлены клинические данные и молекулярно-цитогенетическое описание редкой микродупликации в регионе 20p13 у пациентки с комплексным пороком сердца, аномалией бронхов, дисморфичными фенотипическими чертами, гидроцефалией. Материалы и методы. Пациентке в возрасте 4 месяцев, был проведен полногеномный анализ с использованием ДНК-микрочипов высокого разрешения SurePrint G3 Human Genome CGH+SNP Microarray Kit, 8 х 60K. Результаты. Унаследованная от матери микродупликация включает 46 генов. Фенотип пациентки и данные анамнеза могут быть частично объяснены входящими в перестройку генами. Дупликация генов GnRH-II, OXT у матери могла повлиять на преждевременное рождение ребенка. Гены EBF4 , CENPB , участвуют в процессах клеточного деления и миграции клеток, активации MAP-киназного пути, и таким образом могут быть вовлечены в эмбриогенез. Ген ADAM33 влияет на межклеточные взаимодействия в легких и возможно, связан с развитием брониальных аномалий у ребенка. Дальнейшее наблюдение за ребенком и обследование матери позволят уточнить влияние микродупликации 20p13 на фенотип.

В статье представлен клинический и лабораторный диагностический путь для уточнения диагноза при редкой наследственной патологии у ребенка - синдрома Ноя-Лаксовой. Показаны современные возможности NGS-секвенирования, молекулярно-генетической пренатальной диагностики наследственной патологии и акушерско-гинекологической помощи при следующей беременности в семье.