Муковисцидоз (МВ) – частое моногенное заболевание, возникающее в результате мутаций в гене CFTR. Патогенетическая терапия, несмотря на ее высокую эффективность, подходит не всем пациентам, является пожизненной и сопряжена с побочными эффектами. В связи с этим в мире ведутся масштабные исследования, направленные на разработку этиотропной терапии МВ, в частности, основанные на геномном редактировании. В обзоре рассмотрены некоторые недостатки существующей терапии, описаны методы геномного редактирования и проанализированы опубликованные на текущий момент данные по генной терапии МВ с использованием методов геномного редактирования.

Глутаровая ацидурия 2 типа (ГА2) или множественная недостаточность ацил-КоА-дегидрогеназ (MADD, OMIM 231680) – редкое жизнеугрожающее аутосомное-рецессивное заболевание, связанное с нарушением метаболизма жирных кислот и аминокислот. Данное заболевание включено в перечень заболеваний для расширенного неонатального скрининга в Российской Федерации (РФ) с января 2023 года. В результате первичного скрининга в региональных центрах была сформирована группа новорожденных для этапа подтверждающей диагностики в ФГБНУ Медико-генетический научный центр имени академика Н.П. Бочкова (ФГБНУ МГНЦ) (N=27). При подтверждающей диагностике проводилось повторное определение концентрации аминокислот и ацилкарнитинов крови методом тандемной масс-спектрометрии (ТМС) (ретест), а также определение концентрации органических кислот мочи методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС) и молекулярно-генетическое исследование кодирующей области генов ETFA, ETFB, ETFDH. Диагноз ГА2 был подтвержден у 6 пациентов. Частота ГА2 в РФ составила 1:205233 живых новорожденных, что сопоставимо с данными по Европе и США. При подтверждающей биохимической диагностике выявлено, что наиболее информативным биомаркером для постановки диагноза является повышение концентрации среднецепочечных ацилкарнитинов (С8-С12) и определение ранее неиспользованного в алгоритме скрининга ГА2-индекса (соотношение [C4xC5x C8xC14]/[C0xC3]), повышение которого было выявлено у 5 из 6 пациентов. Молекулярные причины развития ГА2 выявлены у всех 6 пациентов. У пяти новорожденных обнаружены биаллельные мутации в гене ETFDH (четыре в FAD-связывающем домене), у одного новорожденного выявлены ранее не описанные нуклеотидные варианты в гене ETFA. На момент обследования симптомы присутствовали у трех новорожденных (все носители мутаций в гене ETFDH). У двух пациентов с тяжелой формой ГА2 (один с летальным исходом) был выявлен вариант c.652G>A (p.Asp218Asn) в гомозиготном состоянии, что позволяет предположить его ассоциацию с тяжелым неонатальным фенотипом ГА2. По результатам скрининга можно сделать вывод о том, что мутации в гене ETFDH могут быть ассоциированы с более тяжелым фенотипом ГА2, чем предполагалось ранее, а также рекомендовать расчет ГА2-индекса [C4xC5 x C8xC14]/[C0xC3] для повышения эффективности биохимического скрининга на ГА2.

Введение. Поиск модификаторов тяжести спинальной мышечной атрофии (СМА 5q), а также изучение известных модификаторов в различных когортах пациентов остаются актуальной задачей из-за невозможности объяснить клиническое разнообразие СМА 5q лишь вариациями копий гена SMN2. В ряде работ была описана ассоциация варианта c.859G>C в экзоне 7 SMN2 с более мягким клиническим фенотипом СМА 5q из-за увеличения включения экзона 7 в транскрипт гена SMN2 и, следовательно, генерирования большего количества функционального белка SMN.

Цель исследования: изучить модифицирующее действие варианта c.859G>C в клинической структуре СМА 5q у российских пациентов.

Материалы. Поиск варианта c.859G>C p. (Gly287Arg) гена SMN2 проведен у 488 неродственных пациентов, направленных с 2020 по 2022 гг. на молекулярно-генетическую диагностику СМА 5q в лабораторию ДНК-диагностики ФГБНУ МГНЦ. Контрольную группу составили 200 образцов ДНК жителей РФ с 2 копиями SMN1 и 2 копиями SMN2.

Методы: мультиплексная проба-зависимая лигазная реакция с последующей амплификацией (MLPA).

 Результаты: частота c.859G>C гена SMN2 у российских пациентов со СМА 5q составила 0,2%. Таким образом, оценить влияние c.859G>C в качестве фактора, модифицирующего фенотип СМА 5q, не представляется возможным из-за крайне низкой частоты встречаемости данного варианта.

Специалисты, работающие в области пренатальной диагностики хромосомных болезней, регулярно сталкиваются с проблемой мозаицизма. Хорошо известно существование мозаицизма, ограниченного плацентой, при котором у плода имеется нормальный хромосомный набор, а в плаценте могут быть обнаружены те или иные хромосмные аномалии. Существует, однако, и другой тип – эмбриональный мозаицизм. В этом случае в клетках плаценты может быть обнаружен нормальный хромосомный набор, при этом у плода имеется хромосомная патология. Также возможен вариант мозаицизма, при котором в плаценте и у плода присутствуют разные варианты аномального кариотипа. В данной работе рассматривается несколько клинических случаев эмбрионального мозаицизма, выявленных при проведении пренатальной диагностики хромосомных аномалий. В исследование вошли пять пациенток, которым выполнялись инвазивная пренатальная диагностика и/или неинвазивное пренатальное тестирование в НИИ АГиР им. Д. Отта в 2012-2023 гг. Диагностику хромосомной патологии выполняли с использованием стандартного кариотипирования, FISH, ХМА, НИПТ. Обсуждаются возможные причины дискордантных результатов и способы оптимизации диагностических алгоритмов.

Введение. Обнаружение интересующих генетических вариантов при мозаичных формах заболеваний может быть существенно осложнено малой представленностью таковых в биологическом материале, взятом для анализа. Существует широкий спектр методологических подходов для выявления редких генетических вариантов в клинико-лабораторной диагностике, однако не все они могут быть доступны для многих лабораторий из-за различных ограничений. Метод с применением дуплекс-специфической нуклеазы (ДСН) с последующим секвенированием по Сэнгеру нацелен на обнаружение низкопредставленных однонуклеотидных генетических вариантов практически в любой точке генома.

Цель: усовершенствование метода молекулярно-генетической диагностики мозаичных форм генетических заболеваний с применением ДСН на примере PIK3CA-ассоциированного спектра избыточного роста (PROS).

Методы. Материалом для исследования послужила ДНК из лейкоцитов периферической крови и биоптатов тканей. Для определения аналитических свойств метода моделировали уровень представленности альтернативного аллеля путём добавления в реакционную смесь образцов ДНК, гомозиготных по полиморфному и референсному вариантам, в разном соотношении.

Результаты. Минимально достоверно детектируемый уровень представленности альтернативного аллеля составил 1,5%. С использованием метода, основанного на применении ДСН, были подтверждены ранее выявленные на NGS-панели с глубоким покрытием генетические варианты PIK3CA у 9 пациентов с клиническими проявлениями PROS.