сгенерировать QR код
Открытый доступ
Только для подписчиков
Разработка методики количественной оценки молекул TREC и KREC в цельной крови и сухих пятнах крови методом цифровой ПЦР
https://doi.org/10.25557/2073-7998.2024.10.55-62
Аннотация
Существует целый ряд патологических состояний, сопровождаемых сниженными показателями Т- и В-лимфоцитов. Оценка этих показателей является жизненно важной для новорожденных, так как без своевременной диагностики и терапии нарушение иммунитета может привести к инфекционным заболеваниям с тяжелым течением, инвалидизации и высокой летальности. Цель исследования заключалась в разработке высокочувствительного и прецизионного метода для подсчета количества наивных Т- и В-лимфоцитов на основе определения эксцизионных кольцевых молекул ДНК TREC и KREC методом цифровой ПЦР. В результате был разработан специфический набор праймеров и проб, позволяющий с высокой точностью определять количество молекул TREC и KREC, а также проводить подсчет количества ядросодержащих клеток. Предложенная методика демонстрирует высокую диагностическую специфичность и чувствительность. Методика может быть применена как скрининговая диагностика иммунодефицитных состояний новорожденных, так и для оценки иммунного статуса у взрослого населения при различных иммунопатологических состояниях.
При поддержке: Исследование выполнено в рамках поисковых научных исследований 123041700028-8 от 17.04.2023 г.
Об авторах
А. А. Слепцов
ФГБНУ Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук,
Научно-исследовательский институт медицинской генетики
Россия
Россия
634050, г. Томск, ул. Набережная реки Ушайки, д. 10
Д. С. Орлов
ФГБНУ Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук,
Научно-исследовательский институт медицинской генетики
Россия
Россия
634050, г. Томск, ул. Набережная реки Ушайки, д. 10
С. А. Огородников
ФГБНУ Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук,
Научно-исследовательский институт медицинской генетики
Россия
Россия
634050, г. Томск, ул. Набережная реки Ушайки, д. 10
М. С. Назаренко
ФГБНУ Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук,
Научно-исследовательский институт медицинской генетики; ФГБОУ ВО Сибирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия
Россия
634050, г. Томск, ул. Набережная реки Ушайки, д. 10
634050, г. Томск, Московский тракт, д. 2
Список литературы
1. van Zelm M.C., Szczepanski T., van der Burg M. et al. Replication history of B lymphocytes reveals homeostatic proliferation and extensive antigen-induced B cell expansion. J Exp Med. 2007 Mar 19;204(3):645-655. doi: 10.1084/jem.20060964.
2. Serana F., Chiarini M., Zanotti C. et al. Use of V(D)J recombination excision circles to identify T- and B-cell defects and to monitor the treatment in primary and acquired immunodeficiencies. J Transl Med. 2013 May 9;11:119. doi: 10.1186/1479-5876-11-119.
3. King J.R., Hammarström L. Newborn Screening for Primary Immunodeficiency Diseases: History, Current and Future Practice. J Clin Immunol. 2018 Jan;38(1):56-66. doi: 10.1007/s10875-017-0455-x.
4. Drylewicz J., Vrisekoop N., Mugwagwa T. et al. Reconciling Longitudinal Naive T-Cell and TREC Dynamics during HIV-1 Infection. PLoS One. 2016 Mar 24;11(3):e0152513. doi: 10.1371/journal.pone.0152513.
5. Törlén J., Gaballa A., Remberger M. et al. Effect of Graft-versusHost Disease Prophylaxis Regimens on T and B Cell Reconstitution after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation. Biol Blood Marrow Transplant. 2019 Jun;25(6):1260-1268. doi: 10.1016/j.bbmt.2019.01.029.
6. Barbaro M., Ohlsson A., Borte S. et al. Newborn Screening for Severe Primary Immunodeficiency Diseases in Sweden-a 2-Year Pilot TREC and KREC Screening Study. J Clin Immunol. 2017 Jan;37(1):51-60. doi: 10.1007/s10875-016-0347-5.
7. Гордукова М.А., Оскорбин И.П.., Мишукова О.В. и др. Разработка набора реагентов для количественного определения молекул днк trec и krec в цельной крови и сухих пятнах крови методом мультиплексной пцр в режиме реального времени. Медицинская иммунология. 2015;17(5):467-478. doi: 10.15789/1563-0625-2015-5-467-478.
8. Черемохин Д.А., Шинвари Х., Дерябина С.С. и др. Анализ уровней TREС и KREC в образцах сухой крови новорожденных разного гестационного возраста и веса. Acta Naturae. 2022; 14 (1): 101-108. doi: 10.32607/actanaturae.11501.
9. Huggett J.F., Cowen S., Foy C.A. Considerations for digital PCR as an accurate molecular diagnostic tool. Clin Chem. 2015 Jan;61(1):79- 88. doi: 10.1373/clinchem.2014.221366.
10. Hindson B.J., Ness K.D., Masquelier D.A. et al. High-throughput droplet digital PCR system for absolute quantitation of DNA copy number. Anal Chem. 2011 Nov 15;83(22):8604-10. doi: 10.1021/ac202028g.
11. Hall E.M., Flores S.R., De Jesús V.R. Influence of Hematocrit and Total-Spot Volume on Performance Characteristics of Dried Blood Spots for Newborn Screening. Int J Neonatal Screen. 2015;1(2):69- 78. doi: 10.3390/ijns1020069.
12. Слепцов А.А., Медведев С.П., Назаренко М.С.; Томский НИМЦ. Рекомбинантная плазмидная ДНК pGEM-TCRACsjTREC- sjKREC, содержащая нуклеотидныепоследовательности локуса гена Т-лимфоцитарного α-рецептора и сигнальные фрагменты эксцизионных колец Т- и В-клеточного рецепторов. Патент №2807806 РФ. МПК C12Q 1/6809 C12N 15/70. № 2022132020; Заявл.08.12.22; Опубл. 21.11.23., Бюл. № 33.
13. Zakharova I.S., Shevchenko A.I., Tmoyan N.A. et al. Induced pluripotent stem cell line ICGi038-A, obtained by reprogramming peripheral blood mononuclear cells from a patient with familial hyperch o l e s ter o l em i a d u e to com p o u n d h eter o z y g o u s c.1246C>T/c.940+3_940+6del mutations in LDLR. Stem Cell Res. 2022 Apr;60:102702. doi: 10.1016/j.scr.2022.102702.
14. Седых А.В., Сайтгалина М.А., Останкова Ю.В., Тотолян А.А. Сравнительный анализ наборов реагентов для выделения ДНК из сухих пятен крови. Медицинская иммунология. 2023;25(6):1453-1462. doi: 10.15789/1563-0625-CAO-2895.
15. Vidal-Folch N., Milosevic D., Majumdar R. et al. A Droplet Digital PCR Method for Severe Combined Immunodeficiency Newborn Screening. J Mol Diagn. 2017 Sep;19(5):755-765. doi: 10.1016/j.jmoldx.2017.05.011.
Рецензия
Для цитирования:
Слепцов А.А., Орлов Д.С., Огородников С.А., Назаренко М.С. Разработка методики количественной оценки молекул TREC и KREC в цельной крови и сухих пятнах крови методом цифровой ПЦР. Медицинская генетика. 2024;23(10):55-62. https://doi.org/10.25557/2073-7998.2024.10.55-62
For citation:
Sleptсov A.A., Orlov D.S., Ogorodnikov S.A., Nazarenko M.S. Development of a method for quantitative assessment of TREC and KREC molecules in whole blood and dried blood spots using digital PCR. Medical Genetics. 2024;23(10):55-62. (In Russ.) https://doi.org/10.25557/2073-7998.2024.10.55-62
Просмотров:
95
Послать статью по эл. почте 