Определение носительства «химерных» генов CYP21A1P/CYP21A2 в семьях, имеющих пробанда с неклассической формой врожденной дисфункции коры надпочечников

Более 90% случаев врожденной дисфункции коры надпочечников (ВДКН) связаны с изменениями в гене CYP21A2, из которых около 20% приходится на различные типы «химерных» генов CYP21A1P/CYP21A2. Проблема идентификации «химерных» генов и взаимосвязи их типов с клиническими формами ВДКН актуальна до настоящего времени. Исследование посвящено анализу «химерного» гена CH4 при неклассической форме ВДКН. В работе использовали методы ПЦР-ПДРФ анализа и секвенирования по Сэнгеру. Проанализированы образцы ДНК 3-х пробандов с неклассической формой ВДКН и их родителей. ПЦР-ПДРФ анализ с CYP21A2 генспецифичными праймерами не позволил определить химерные гены у родителей пробандов, но дал возможность предположить их наличие у самих пробандов. Комплексный анализ с использованием всех методов и псевдоген- и генспецифичных праймеров показал наличие у каждого из трех пробандов химерного гена CH4 в компаунд-гетерозиготном состоянии: в первом случае - с вариантом I173N, во втором - с i2 splice и в 3-м с - 30кб делецией гена CYP21A2. Для молекулярно-генетического анализа в семьях с дефицитом 21-гидроксилазы необходимо применение как анализа точковых мажорных мутаций, так и методов, выявляющих делеционно-дупликационные события в гене CYP21A2. Наличие химерного гена CH4 с точкой разрыва между позициями chr6:38038514 и chr6:32038938 (GRCh38) в компаунде с другими патогенными вариантами приводит к неклассической форме ВДКН.

ВДКН, неклассическая форма, химерный ген, CYP21A2

1. Speiser P.W., Azziz R., Baskin L.S. Congenital adrenal hyperplasia due to steroid 21-hydroxylase deficiency: an endocrine society clinical practice guideline. J Clin Endocrinol Metabol. 2010;95:4133-4160.

2. Speiser P.W., Dupont J., Zhu D. Disease expression and molecular genotype in congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency.J Clin Endocrinol Metabol. 1992; 90: 584-595.

3. Concolino P., Mello E., Minucci A. et al. A new CYP21A1P/CYP21A2 chimeric gene identified in an Italian woman suffering from classical congenital adrenal hyperplasia form. BMC Medical Genetics.2009;10:72.

4. New M.I., Abraham M., Gonzalez B. Genotype-phenotype correlation in 1500 families with congenital adrenal hyperplasia owing to 21-hydroxylase deficiency. Proc Nat Acad Sci USA. 2013;110:2611-2616.

5. Miller S.A., Dykes D.D., Polesky H.F. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res.1988;16:1215.

6. Greene Ch.N., Cordovado S.K., Turner D.P. Novel method to characterize CYP21A2 in Florida patients with congenital adrenal hyperplasia and commercially available cell lines. Molecular Genetics and Metabolism Reports. 2014;1:312-323.

7. Bobba A., Iolascon A., Giannattasio S. et al. Characterisation of CAH alleles with non-radioactive DNA single strand conformation polimorphism analysis of the CYP21 gene. J. Med. Genet. 1997;34:223-228.

8. Lee H.H., Tsai F.J., Lee Y.J., Yang Y.C. Diversity of the CYP21A2 gene: A 6.2-Kb TaqI fragment and a 3.2-Kb TaqI fragment mistaken as CYP21A1P. Molecular Genetics and Metabolism. 2006;88:372-377.

9. Баранник А.П., Колтунова А.А., Озолиня Л.А. и др. Новая система ДНК диагностики мутаций в гене CYP21 человека, ассоциированных с врожденной гиперплазией коры надпочечников. Биоорганическая химия. 2010; 36(3):354-365.

10. Smith G.R., Kunes S.M., Schultz D.W. et al. Structure of chi hotspots of generalized recombination. Cell. 1981;24:429-436.

11. Koppens P.F., Smeets H.J., de Wijs I.J., Degenhart H.J. Mapping of a de novo unequal crossover causing a deletion of the steroid 21- hydroxylase (CYP21A2) gene and a non-functional hybrid tenascin-X (TNXB) gene. J Med Genet. 2003;40:53.