Технология диагностики галактоземии новорожденных

Аннотация

Галактоземия – аутосомно-рецессивное наследственное заболевание, связанное с нарушением преобразования галактозы в  глюкозу. Поскольку галактоза является одним из основных сахаров материнского молока и поступает в организм новорожденного с первых часов жизни, ранняя диагностика галактоземии является приоритетной задачей. Целью этого исследования являлась разработка технологии ранней диагностики галактоземии с использованием отечественных реагентов путем измерения общей галактозы в сухих пятнах крови (DBS). Набор основан на ферментативном окислении галактозы в галактонат галактозодегидрогеназой, при котором происходит восстановление NAD⁺ до NADH. Регистрация происходит по измерению интенсивности флуоресценции NADH. Галактозо-1-фосфат, содержащийся в эритроцитах, под действием фермента щелочной фосфатазы превращается в галактозу. На сегодняшний день разработаны регламент и инструкция к набору. Нами разработаны штаммы-продуценты галактозодегидрогеназы и щелочной фосфатазы. Полученные ферменты могут долгое время храниться в лиофилизованном виде и сохраняют высокую активность после реконструкции в буферных растворах. Новый набор не уступает по точности определения галактозы аналогичным, но имеет новую реагентную базу.