119071, г. Москва, Ленинский проспект, д. 33, стр. 2
33, build. 2, Leninsky prospect, Moscow, 119071
119071, г. Москва, Ленинский проспект, д. 33, стр. 2.
33, build. 2, Leninsky prospect, Moscow, 119071
Галактоземия – аутосомно-рецессивное наследственное заболевание, связанное с нарушением преобразования галактозы в глюкозу. Поскольку галактоза является одним из основных сахаров материнского молока и поступает в организм новорожденного с первых часов жизни, ранняя диагностика галактоземии является приоритетной задачей. Целью этого исследования являлась разработка технологии ранней диагностики галактоземии с использованием отечественных реагентов путем измерения общей галактозы в сухих пятнах крови (DBS). Набор основан на ферментативном окислении галактозы в галактонат галактозодегидрогеназой, при котором происходит восстановление NAD+ до NADH. Регистрация происходит по измерению интенсивности флуоресценции NADH. Галактозо-1-фосфат, содержащийся в эритроцитах, под действием фермента щелочной фосфатазы превращается в галактозу. На сегодняшний день разработаны регламент и инструкция к набору. Нами разработаны штаммы-продуценты галактозодегидрогеназы и щелочной фосфатазы. Полученные ферменты могут долгое время храниться в лиофилизованном виде и сохраняют высокую активность после реконструкции в буферных растворах. Новый набор не уступает по точности определения галактозы аналогичным, но имеет новую реагентную базу.
Galactosemia is an autosomal recessive hereditary disease associated with a violation of the conversion of galactose into glucose. Galactose is one of the main sugars present in human milk and enters the newborn’s body during the first hours of life. For this reason, early diagnosis of galactosemia is a priority. The objective of this study was to develop a technology consisting of domestic reagents for early diagnosis of galactosemia by measuring total galactose in dry blood spots (DBS). The technology is based on the enzymatic oxidation of galactose to galactonate by galactose dehydrogenase, in which NAD+ is reduced to NADH. The fluorescence intensity of NADH is measured, and the results are recorded. The conversion of galactose-1-phosphate, present in erythrocytes, to galactose is catalysed by the enzyme alkaline phosphatase. Regulations and instructions for the kit have been developed. The development of strains capable of producing galactose dehydrogenase and alkaline phosphatase has also been undertaken. These enzymes are capable of being stored for extended periods in lyophilized form and exhibit high activity after reconstruction in buffer solutions. The novel technology exhibits comparable precision in galactose quantification to its analogous counterparts, yet it employs an alternative reagent foundation.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.