Анализ нецелевой активности CRISPR/Cas9 в дрожжевой модели

Аннотация

Методы геномного редактирования на основе Cas9 могут представлять опасность при использовании в медицине, поскольку системы CRISPR/Cas9 являются мутагенными факторами, способными вносить одно- и двунитевые разрывы в ДНК как в целевых, так и в нецелевых участках генома и провоцировать нежелательные мутации в месте разрыва. Нецелевая активность редактирующего комплекса связана с тем, что РНК, направляющая нуклеазу Cas9 в сайт редактирования, способна распознавать не полностью комплементарные ей 20-нуклеотидные сайты генома, и даже при неполной комплементарности направляющей РНК и последовательности мишени возможно формирование двунитевого разрыва. В данной работе мы использовали дрожжей Saccharomyces cerevisiae в качестве модельного организма для оценки влияния неспаренностей в различных положениях гидовой РНК на эффективность редактирования с использованием Cas9.