Фрагментный анализ полиморфизма (TG)_mTn интрона 8 гена CFTR

Полиморфный политимидиновый локус ( Tn) , локализованный в области сайта сплайсинга интрона 8 гена трансмембранного регулятора муковисцидоза ( CFTR ) ассоциирован с различной эффективностью сплайсинга экзона 9. Гены, несущие 5T -аллель, имеют наибольший уровень потери экзона 9 в мРНК. TG -повторы - (TG)m , непосредственно предшествующие Tn , также модулируют сплайсинг и могут являться причиной неполной пенетрантности аллеля 5T . Анализ полиморфизма (TG)_mTn интрона 8 важен для диагностики врожденной аплазии семявыносящих протоков, а также для изучения полиморфного фона гена CFTR . В нашем исследовании предложен метод двухраундной ПЦР и фрагментного анализа для генотипирования поли-Т-последовательности, TG -тракта и молекулярного гаплотипирования (TG)_mTn -локуса. Метод был применен для поли-Т-генотипирования 2261 образца (без частых мутаций гена), и (TG)_mTn -гаплотипирования 292 из них. Частоты аллелей 5T , 7T и 9T соответствовали данным для европеоидных популяций. Наиболее распространенным TG -аллелем был 11TG (59,0%), гаплотипом - 7T-11TG (52,3%). Аллель 9T был преимущественно сцеплен с 10TG (71,9%). Среди хромосом, несущих аллель 5T, гаплотип 5T-12TG обнаружен в 18,0%, 5T-13TG - в 1,1%.

CFTR, муковисцидоз, аплазия семявыносящих протоков, IVS8 CFTR, 5T-аллель, IVS8-TG, фрагментный анализ, CFTR, cystic fibrosis, CBAVD, intron 8 poly-T locus, 5T allele, IVS8-TG, IVS8 polymorphism, fragment analysis

1. Dequeker E, Stuhrmann M, Morris M et al. Best practice guidelines for molecular genetic diagnosis of cystic fibrosis and CFTR-related disorders - updated European recommendations. European Journal of Human Genetics. 2008:1-15.

2. Ferec C, Cutting GR Assessing the Disease-Liability of Mutations in CFTR. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2012:1-13.

3. Yu J, Chen Z, Ni Y, Li Z. CFTR mutations in men with congenital bilateral absence of the vas deferens (CBAVD): a systemic review and meta-analysis. Human Reproduction. 2012;27(1):25-35.

4. Claustres M. Molecular pathology of the CFTR locus in male infertility. Reproductive BioMedicine Online. 2005;10(1):14-41.

5. Radpour R, Gourabi H, Gilani MAS, Dizaj AV. Molecular Study of (TG)m(T)n Polymorphisms in Iranian Males With Congenital Bilateral Absence of the Vas Deferens. Journal of Andrology. 2007;28(4):541-547.

6. Groman, JD, Hefferon TW, Casals T et al. Variation in a repeat sequence determines whether a common variant of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene is pathogenic or benign. American Journal of Human Genetics. 2004;74:176-179.

7. Gelfi C, Perego M, Righetti PG et al. Rapid capillary zone electrophoresis in isoelectric histidine buffer: high resolution of poly-T tract allelic variants in intron 8 of the CFTR gene. Clinical Chemistry. 1998;44(5):906-913.

8. Tuerlings J, Mol B, Kremer J et al. Mutation frequency of cystic fibrosis transmembrane regulator is not increased in oligozoospermic male candidates for intracytoplasmic sperm injection. Fertility and Sterility. 1998;69(5):899-903.

9. Иващенко ТЭ, Баранов ВС. Биохимические и молекулярно-генетические основы патогенеза муковисцидоза. Интермедика, Санкт-Петербург. 2002:256.

10. Huang Q, Ding W, Wei MX. Comparative analysis of common CFTR polymorphisms poly-T, TG-repeats and M470V in a healthy Chinese population. World Journal of Gastroenterology. 2008;14(12):1925-1930.

11. Du Q, Li Z, Pan Y et al. The CFTR M470V, Intron 8 Poly-T, and 8 TG-Repeats Detection in Chinese Males with Congenital Bilateral Absence of the Vas Deferens. BioMed Research International. 2014:1-7.

12. Nam MH, Hijikata M, Tuan LA et al. Variations of the CFTR Gene in the Hanoi-Vietnamese. American Journal of Medical Genetics. 2005;136A:249-253.

13. Millson A, Pont-Kingdon G, Page S, Lyon E. Direct Molecular Haplotyping of the IVS-8 Poly(TG) and PolyT Repeat Tracts in the Cystic Fibrosis Gene by Melting Curve Analysis of Hybridization Probes. Clinical Chemistry. 2005;51(9):1619-1623.

14. Gallati S. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator mutations in azoospermic and oligospermic men and their partners. Reproductive BioMedicine Online. 2009;19(5):685-694.