Москва, 115478.
Москва, 119991.
Москва, 115478, 117997.
Москва, 115478.
Москва, 115478.
Москва, 115478, 117997, 119991.
Москва, 115478, 117997.
Нарушение распределения метилирования является функциональным событием процесса лейкемогенеза и терапевтической мишенью эпигенетических препаратов. Для идентификации аномального метилирования при остром миелоидном лейкозе (ОМЛ) у детей была разработана система мультилокусной метилчувствительной полимеразной цепной реакции (МЧ-ПЦР) для фрагментов, принадлежащих промоторным областям генов EGFLAM, TMEM176A/176B, GSG1L, CLDN7, CXCL14 и SOX8, отобранных с использованием метода непредвзятого скрининга дифференциального метилирования геномов. Система обладает чувствительностью 90-91% в отношении определения наличия злокачественного процесса, является универсальной системой маркеров ОМЛ у детей, перекрывающей всей молекулярные подтипы опухоли. Проанализированы образцы биологического материала костного мозга (КМ) 39 пациентов с ОМЛ. Курс лечения пациентов включал 4-5 блоков химиотерапии (XT), в зависимости от выставленной группы риска, а также эпигенетические препараты - ATRA и дакоген. Для пациентов с содержанием миелобластов <40% — средний индекс метилирования (ИМ) составил 0,197 ± 0,181, а для пациентов с количеством миелобластных клеток >40% — 0,514 ± 0,228 (р = 0,000736). В группе с низким ИМ полностью отсутствует метилирование генов CLDN7, GSGL1 и EGFLAM. На 15 день после начала первого блока химиотерапии КМ пациентов с первоначальным содержанием миелобластов <40% демонстрирует полное отсутствие метилирования, содержание бластных клеток (БКМ) при этом варьирует от 0 до 40%. В группе с первоначально высоким содержанием миелобластных клеток происходит снижение среднего ИМ c 0,514 до 0,41 за счет снижения частоты метилирования генов CXCL14, TMEM176A/176B, GSGL1 и SOX8, при этом снижения частоты метилирования CLDN7и EGFLAM практически не происходит. 5-дневный курс деметилирующей терапии, сопровождается ростом содержания БКМ и выравниванием профиля метилирования при среднем количестве БКМ в обеих группах <3%. С помощью разработанной системы возможна оценка злокачественной прогрессии БКМ, которые после проведения XT считаются морфологически нормальными, при этом демонстрируя профиль аномального метилирования опухолевых клеток.
An aberrant DNA methylation distribution is a functional event in the process of leukemogenesis and a target of epigenetic therapy. To identify DNA methylation markers most common for any molecular subtype of pediatric acute myeloid leukemia (AML) we have applied a method of unbiased differential methylation screening of the genomes and designed multiplex MS-PCR system of DNA methylation markers belonging to the promoter regions of the genes EGFLAM, TMEM176A/176B, GSG1L, CLDN7, CXCL14 and SOX8. The system has a sensitivity of 90—91% for determining the malignant process. We have studied bone marrow samples from 39 children with AML. All patients were treated by decitabine and ATRA in complex with chemotherapy (CT). Methylation index (MI) was 0.197 ± 0.181 for patients with a myeloblasts content less than 40%, and 0.514 ± 0.222 for patients with myeloblasts content more than 40% (p = 0.000736). Methylation of the CLDN7, GSGL1 and EGFLAM genes is absent in the group with low MI. Patients with the initial content of myeloblasts less than 40% demonstrate absence of methylation on the 15th day after the start of the CT. The average MI decreases in the group with the initially high content of myeloblasts due to decrease in the frequencies of methylation of the genes CXCL14, TMEM176A/176B, GSGL1 and SOX8. The 5-day course of demethylation therapy is accompanied by an increase in the content of blast cells and an equalization of the methylation profile. With the marker system developed it is possible to evaluate the malignant progression of blast cells, which are considered morphologically normal after CT, demonstrating at the same time the abnormal methylation profile of tumor cells.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.