medgenМедицинская генетикаMedical Genetics2073-7998Publishing House «Genius Media» LLC10.25557/2073-7998.2024.07.51-56medgen-2509Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL RESEARCHМутационный статус генов BRAF, NRAS в опухолевом материале пациентов с диагнозом меланома кожиMutational status of BRAF, NRAS genes in tumor material of patients diagnosed with cutaneous melanomaСтефановаЮ. Ю.StefanovaYu. Yu.

350063, г. Краснодар, ул. имени Митрофана Седина, д. 4 

4 Mitrofana Sedina st., Krasnodar, 350063

ПорхановаН. В.PorkhanovaN. V.

350063, г. Краснодар, ул. имени Митрофана Седина, д. 4 

4 Mitrofana Sedina st., Krasnodar, 350063

МурашкоР. А.MurashkoR. A.

350063, г. Краснодар, ул. имени Митрофана Седина, д. 4 

4 Mitrofana Sedina st., Krasnodar, 350063

ТимошкинаН. В.TimoshkinaN. V.

344037, г. Ростов-на-Дону, 14-я линия, д. 63

14th line st., 63, 344037, Rostov-on-Don

МаксимовА. Ю.MaksimovA. Yu.

344037, г. Ростов-на-Дону, 14-я линия, д. 63

14th line st., 63, 344037, Rostov-on-Don

ТимофееваС. В.TimofeevaS. V.

Тимофеева Софья Владимировна

344037, г. Ростов-на-Дону, 14-я линия, д. 63

Sofia V. Timofeeva

14th line st., 63, 344037, Rostov-on-Don

timofeeva.sophia@gmail.comФГБОУ ВО Кубанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения РоссииРоссияKuban State Medical UniversityRussian FederationФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр онкологии Министерства здравоохранения РоссииРоссияNational Medical Research Centre for OncologyRussian Federation2024101020242375156Copyright © Стефанова Ю.Ю., Порханова Н.В., Мурашко Р.А., Тимошкина Н.В., Максимов А.Ю., Тимофеева С.В., 20242024Стефанова Ю.Ю., Порханова Н.В., Мурашко Р.А., Тимошкина Н.В., Максимов А.Ю., Тимофеева С.В.Stefanova Y.Y., Porkhanova N.V., Murashko R.A., Timoshkina N.V., Maksimov A.Y., Timofeeva S.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.medgen-journal.ru/jour/article/view/2509

Меланома − это одно из самых опасных злокачественное заболеваний кожи с высоким риском метастазирования и возникновения рецидивов. Исследования генетических и молекулярных характеристик меланомы имеют важное значение для разработки новых стратегий лечения. Целью данного исследования была оценка мутационного статуса генов BRAF, NRAS в опухолевом материале пациентов с диагнозом меланома кожи. Всего в исследование были включены 54 пациента с подтвержденным диагнозом меланома: мужчин было 36% (n=15), а женщин 64% (n=39). Средний возраст на момент постановки диагноза составил 56 лет. ДНК выделяли из тканей опухоли, фиксированных в формалине и заключённых в парафин (FFPE) с использованием коммерческого набора QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (QIAGENE, Германия). Анализ мутации V600E гена BRAF осуществляли методом аллель-специфичной ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией, были проанализированы кодоны 597–601. Методом классической ПЦР (C1000 Touch BioRad, USA) с последующим прямым секвенированием по Сэнгеру (ABI Prism 3500, Applied Biosystems, USA) в гене NRAS были исследованы экзоны 2 и 3. Статистический анализ данных проводили с помощью программы Statistica 7,0. Мутации в гене BRAF были выявлены в 42,6% образцов (мутация V600E 37,1%, V600K 5,4%), а в гене NRAS − в 14,8% (Q61K 7%). В остальных случаях (42,6%) не было обнаружено изменений ни в одном из проанализированных генов. Мутационный статус был тесно связан с анатомическим расположением опухоли. В группе с мутациями в генах BRAF и NRAS (65,3% и 37,0% соответственно; p=0,002) чаще отмечали пациентов с кожным первичным поражением головы и шеи. Митотическую активность чаще обнаруживали в первичных опухолях у пациентов с мутациями в гене NRAS, чем у пациентов с мутациями в гене BRAF (p =0,002).  

Melanoma is a complex disease influenced by changes in multiple genes and metabolic pathways that continue to evolve throughout the disease. Research into the genetic and molecular characteristics of melanoma is important for the development of new treatment strategies. The purpose of our study was to evaluate the survival rate and mutational status of the BRAF and NRAS genes in tumor material from patients diagnosed with cutaneous melanoma. A total of 54 patients with a confirmed diagnosis of cutaneous melanoma were included in the study: 36% were men (n=15), and women were 64% (n=39). The average age at diagnosis was 56 years. DNA was isolated from sections of paraffin blocks (FFPE) using a commercial kit QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (QIAGENE, Germany). Analysis of the V600E mutation of the BRAF gene was carried out by allele-specific real-time PCR.  Exons 2 and 3 in the NRAS gene were analyzed by classical PCR (C1000 Touch BioRad, USA) followed by direct Sanger sequencing (ABI Prism 3500, Applied Biosystems, USA). Statistical analysis of the data was carried out using the Statistica 7.0 program. BRAF mutations were detected in 42.6% (V600E mutation 37.1%, V600K 5.4%), and NRAS mutations in 14.8% (Q61K 7%). In the remaining cases (42.6%), no changes were detected in any of the genes analyzed. The mutation status was closely related to the anatomical location of the tumor, so in the group with mutations in the BRAF and NRAS genes (65.3% and 37.0%, respectively; p = 0.002) patients with cutaneous primary lesions of the head and neck were noted. Mitotic activity was more frequently detected in primary tumors from patients with NRAS mutations than in patients with BRAF mutations (p = 0.002). 

меланома кожиBRAFNRASmelanomaBRAFNRASReferencesSchadendorf D., Fisher D.E., Garbe C., et al. Melanoma. Nature reviews. Disease primers, 2015;1:15003. https://doi.org/10.1038/nrdp.2015.3Schadendorf D., Fisher D.E., Garbe C., et al. Melanoma. Nature reviews. Disease primers, 2015;1:15003. https://doi.org/10.1038/nrdp.2015.3Delyon J., Lebbe C., Dumaz N. Targeted therapies in melanoma beyond BRAF: targeting NRAS-mutated and KIT-mutated melanoma. Current opinion in oncology, 2020;32(2):79–84. https://doi.org/10.1097/CCO.0000000000000606Delyon J., Lebbe C., Dumaz N. Targeted therapies in melanoma beyond BRAF: targeting NRAS-mutated and KIT-mutated melanoma. Current opinion in oncology, 2020;32(2):79–84. https://doi.org/10.1097/CCO.0000000000000606Murphy B.M., Terrell E.M., Chirasani V.R., et al. Enhanced BRAF engagement by NRAS mutants capable of promoting melanoma initiation. Nature communications, 2022:13(1):3153. https://doi.org/10.1038/s41467-022-30881-9Murphy B.M., Terrell E.M., Chirasani V.R., et al. Enhanced BRAF engagement by NRAS mutants capable of promoting melanoma initiation. Nature communications, 2022:13(1):3153. https://doi.org/10.1038/s41467-022-30881-9Heppt M.V., Siepmann T., Engel J., et al. Prognostic significance of BRAF and NRAS mutations in melanoma: a German study from routine care. BMC cancer, 2017;17(1):536. https://doi.org/10.1186/s12885-017-3529-5Heppt M.V., Siepmann T., Engel J., et al. Prognostic significance of BRAF and NRAS mutations in melanoma: a German study from routine care. BMC cancer, 2017;17(1):536. https://doi.org/10.1186/s12885-017-3529-5Wellbrock C., Karasarides M., Marais R. The RAF proteins take centre stage. Nature reviews Molecular cell biology, 2004;5(11):875-885.Wellbrock C., Karasarides M., Marais R. The RAF proteins take centre stage. Nature reviews Molecular cell biology, 2004;5(11):875-885.Mandalà M., Voit C. Targeting BRAF in melanoma: biological and clinical challenges. Critical reviews in oncology/hematology, 2013;87(3):239–255. https://doi.org/10.1016/j.critrevonc.2013.01.003Mandalà M., Voit C. Targeting BRAF in melanoma: biological and clinical challenges. Critical reviews in oncology/hematology, 2013;87(3):239–255. https://doi.org/10.1016/j.critrevonc.2013.01.003Jakob J.A., Bassett R.L. Jr., Ng C.S., et al. NRAS mutation status is an independent prognostic factor in metastatic melanoma. Cancer, 2012;118(16):4014–4023. https://doi.org/10.1002/cncr.26724Jakob J.A., Bassett R.L. Jr., Ng C.S., et al. NRAS mutation status is an independent prognostic factor in metastatic melanoma. Cancer, 2012;118(16):4014–4023. https://doi.org/10.1002/cncr.26724Ugurel S., Thirumaran R.K., Bloethner S., et al. B-RAF and N-RAS mutations are preserved during short time in vitro propagation and differentially impact prognosis. PloS one, 2007;2(2):e236. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0000236Ugurel S., Thirumaran R.K., Bloethner S., et al. B-RAF and N-RAS mutations are preserved during short time in vitro propagation and differentially impact prognosis. PloS one, 2007;2(2):e236. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0000236Devitt B., Liu W., Salemi R., et al. Clinical outcome and pathological features associated with NRAS mutation in cutaneous melanoma. Pigment cell & melanoma research, 2011;24(4):666–672. https://doi.org/10.1111/j.1755-148X.2011.00873.xDevitt B., Liu W., Salemi R., et al. Clinical outcome and pathological features associated with NRAS mutation in cutaneous melanoma. Pigment cell & melanoma research, 2011;24(4):666–672. https://doi.org/10.1111/j.1755-148X.2011.00873.xZhang S., Xie R., Zhong A., et al. Targeted therapeutic strategies for melanoma. Chinese medical journal, 2023. https://doi.org/10.1097/CM9.0000000000002692Zhang S., Xie R., Zhong A., et al. Targeted therapeutic strategies for melanoma. Chinese medical journal, 2023. https://doi.org/10.1097/CM9.0000000000002692Bauer J., Büttner P., Murali R., et al. BRAF mutations in cutaneous melanoma are independently associated with age, anatomic site of the primary tumor, and the degree of solar elastosis at the primary tumor site. Pigment Cell Melanoma Res. 2011;24(2):345-351. doi:10.1111/j.1755-148X.2011.00837.xBauer J., Büttner P., Murali R., et al. BRAF mutations in cutaneous melanoma are independently associated with age, anatomic site of the primary tumor, and the degree of solar elastosis at the primary tumor site. Pigment Cell Melanoma Res. 2011;24(2):345-351. doi:10.1111/j.1755-148X.2011.00837.x

The authors declare that there are no conflicts of interest present.